Struktura podjednostki czynnika normalnego i hemofilnego VIII

Ludzki czynnik VIII od normalnych i chorych na hemofilię częściowo oczyszczono przez strącanie etanolem i glikolem polietylenowym. Ostateczne oczyszczenie osiągnięto przez filtrację żelową w 2 lub 4% agarozie lub chromatografię jonowymienną na dietyloaminoetylocelulozie. Porównywalne ilości wysoko oczyszczonego białka uzyskano z normalnego i hemofilowego osocza po etapie chromatografii agarozowej. Wysoko oczyszczony czynnik VIII nie został zdysocjowany przez 6 M chlorowodorek guanidyny lub 1% dodecylosiarczan sodu. Jednakże, po redukcji za pomocą (3-merkaptoetanolu i analizowane przez elektroforezę w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu, stwierdzono, że pojedynczy składnik podjednostkowy o szacowanej masie cząsteczkowej 195 000 dla czynnika VIII prawidłowego i hemofilnego. Za pomocą analizy równowagi sedymentacyjnej normalna podjednostka czynnika VIII była jednorodna i miała oszacowaną masę cząsteczkową 202,000. Polipeptydy podjednostkowe od normalnego lub hemofilnego czynnika VIII zawierały węglowodany. Każdy był jednorodny przez ogniskowanie izoelektryczne. Immunodiffusion oczyszczonego prawidłowego i hemofilnego czynnika VIII przeciwko króliczej surowicy odpornościowej do oczyszczonego prawidłowego ludzkiego czynnika VIII wykazała pojedynczą linię opadów. Bardzo niskie stężenia oczyszczonej ludzkiej trombiny początkowo zwiększyły aktywność normalnego czynnika VIII około trzykrotnie, a następnie stopniowo zniszczyły aktywność o 3 godziny. Tylko minimalna aktywacja wystąpiła z czynnikiem hemofilnym VIII. Zarówno aktywacja, jak i inaktywacja prawidłowego i hemofilnego czynnika VIII nie towarzyszyły wykrywalne zmiany w masie cząsteczkowej podjednostki. Odkrycia te mogą mieć wpływ na definicję defektu molekularnego w czynniku hemofilnym VIII.Images
[patrz też: sp wysoka, tęgoryjec objawy, klykciny konczyste zdjecia ]